Для большинства фенолоксидаз микроскопических грибов мы не располагаем достаточными энзимологическими сведениями об их свойствах. Только немногие ферменты были выделены и очищены до молекулярного состояния, другие же исследовались в форме ферментативно активных препаратов — ацетоновой порошок, бесклеточный экстракт или высоленная белковая фракция. Но и таких ориентировочно изученных фенолоксидаз набирается не так много, в чем можно убедиться, обратившись к приведенным ниже новым данным. Материалы прошлых лет также недостаточны по объему и энзимологическому качеству. Поэтому пришлось временно воздержаться от попыток обнаружить ту или иную специфику, общую именно для фенолоксидаз микромицетов, или сделать корректные выводы о степени их сходства и отличия от одноименных ферментов других больших групп организмов. Экспериментальный фактический материал не стал, однако, от этого менее интересным или ценным, поэтому он будет довольно подробно рассмотрен ниже.
Тирозиназа Neurospora crassa. Первые, теперь уже классические исследования свойств тирозиназы Neurospora были выполнены группой Горовица и Флинг в 60-е годы и уже были рассмотрены нами ранее [Лях, Рубан, 1972, с. 120]. Поэтому мы приведем здесь лишь краткое суммарное заключение из полученных этими исследователями данных. Ферментный препарат получали путем осаждения белка мицелиального экстракта сульфатом аммония, переведения его в ацетон, элюцией с геля сефадекса G-100 и двойной элюцией с целита. Гомогенность препарата была показана ультрацентрифугированием и электрофорезом. Определение молекулярной массы дало величину 3300. Эта единица содержала один атом меди (1). Агрегация в тетрамеры (~130000 дальтонов) осуществлялась легко и обратимо. Число оборотов фермента с ДОФА как субстратом составляло около 19 000 молекул/мин при 30°. Препарат в форме раствора в (NH4)2SO 60%-ного насыщения сохранял стабильность при 4° в течение нескольких месяцев. Изоферменты различались по термостабильности и электрофоретической подвижности. Диапазон pH-оптимума для окисления ДОФА был довольно широк — от pH 5 до pH 8. Субстратами могли служить многие моно- и ортодифенолы. Реакция инактивации субстратом была особенно выражена с пирокатехином. Активность сильно ингибировалась диэтилдитиокарбаматом, азидом, цианидом, фенилтиомочевиной и цистеином, тогда как р-меркурбензоат почти не оказывал влияния [Horowitz et аl., 1970а].