Хромогенный энзим


Возникшее предположение о том, что черный пигмент Az. chroococcum является результатом окислительной энзиматической конверсии тирозина в меланин (Beijerinck, 1901, диг. по Rippel, Ludwig, 1925), пытались подтвердить обнаружением тирозиназной активности. Однако окрашивания раствора тирозина при встряхивании его с культурой азотобактера (хлороформ), т. е. в условиях, выявляющих присутствие тирозиназы у некоторых других микроорганизмов (Stарр, 1923), в этом случае не происходило, но живые клетки обладали способностью окислять тирозин. Это было показано простым опытом: в обычную среду (1% маннит + 0,2% К2НРО4 + агар) вводили тирозин (0,13%), и культуру выдерживали при комнатной температуре. Через несколько дней появлялось быстро нараставшее по интенсивности коричневое окрашивание среды, в то время как в контроле (без микроорганизма) она оставалась бесцветной. «Тирозиназная» реакция наблюдалась и при введении в агар с маннитом пептона (Rippel, Ludwig, 1925).

Непосредственно тирозиназная активность у Az. chroococcum была выявлена Косом (Kos, 1959). Он установил ее внутриклеточную локализацию и связанность с меланиновыми гранулами подобно тому, что было показано в отношении энзима млекопитающих (Seiji, Iwashita, 1963). По активности и субстратной специфичности препараты тирозиназы азотобактера (суспензия покоящихся клеток и фракция пигментных гранул) похожи на растительный энзим: они окисляют тирозин, ДОФА, пирокатехин и паракрезол, причем последние два соединения очень быстро. (Тирозиназа животных окисляет эти субстраты слабо). Очистка препаратов приводила к снижению или к потере активности в отношении монофенолов. Энзим ингибировался цианидом, связывающим медь.