Метода авторадиографии


Еще одним доводом в пользу возможности конкуренции за ДОФА между меланоцитами и микобактериями могут служить положительные результаты опытов по связыванию и поглощению H3-DL-ДОФА клетками М. leprae, выделенными из лепрозных узлов. Введение в инкубационную систему диэтилдитиокарбамата заметно ингибировало поступление ДОФА в клетку, и меченый ДОФА так же легко отмывался, как и в контрольных опытах с клетками М. phlei, которые заведомо не связывали и не окисляли ДОФА из-за отсутствия ДОФА-оксидазной активности. Предполагают, что клетки возбудителя проказы имеют какой-то специфический и отсутствующий у других микобактерий рецепторной участок, который связывает этот субстрат. Возможно, что аналогичный (по крайней мере функционально) участок есть и у меланоцитов [Harris, Prabhakaran 1975].

Далее было установлено, что гораздо эффективнее чем Н3-ДОФА М. leprae (интактные клетки и фракция частиц) связывает С14- ДОФА. Вся метка при этом переходит в продуцирующийся меланиновый пигмент. При окислении Н3-ДОФА большая часть трития выявлялась в воде Н3 ОН, образующейся в результате реакции [Prabhakaran et al., 1976а, b].

К этому надо добавить также недавно установленный с помощью метода авторадиографии высокого разрешения факт поглощения меченого ДОФА суспензиями М. leprae из гомогенета пораженных тканей и последующего характерного распределения метки внутри клетки. Наглядная картина вырисовывалась уже через 48 час после начала инкубации препарата; микроорганизмы метились неравномерно — сильно меченные клетки располагались обычно внутри групп. Предполагают, что эти клетки происходили из центров активного роста популяции [Ambrose et al., 1974]. Авторадиографическое изучение обмена меток ДОФА служит эффективным методом наблюдения за развитием М. leprae в тканях человека и животных [Drutz, 1976].