Об условиях проявления тирозиназной активности у других видов рода Aspergillus


Выделение данных об обнаружении тирозиназной активности у Asp. oryzae, Asp. flavus и некоторых других видов рода Aspergillus в отдельный раздел продиктовано более всего спецификой ее проявления у этих организмов. В отличие от положения у Asp. nidulans, где тирозиназа принимает участие в «обычном» биологическом функционировании организма в диапазоне допустимых для него условий, фермент двух названных выше грибов in vivo присутствует только в латентной форме и активизуется лишь под действием высокой кислотности среды, если клетки при этом находятся в состоянии «покоя». При таком условии многие штаммы Asp. oryzae и Asp. flavus начинают интенсивно превращать L-тирозин в меланиновый пигмент через L-ДОФА. Если же L-тирозин добавляли к среде для культивирования, то в процессе роста те же организмы разрушали этот субстрат фермента через дезаминирование, и это выглядело так, как если бы никакой тирозиназной активности у них и не существовало. Правда, был найден штамм Asp. chevalieri который и в этих условиях проявлял активность, но она была очень низка (степень превращения L-тирозина в L-ДОФА не превышала 20%).

У Asp. oryzae 15042, наиболее активном и наиболее изученном в этом отношении штамме, тирозиназа локализовалась внутри клетки и в среду не экскретировалась. Ее активность могла быть выявлена только на поздних стадиях роста культуры после полного исчезновения из среды глюкозы, предполагаемого репрессора синтеза фермента. Благоприятное действие на накопление тирозиназы оказывало дополнение среды источниками азота, а одним из критических для синтеза фермента факторов оказался низкий уровень снабжения растущей культуры кислородом. Эффект, однако, не проявлялся на стадии, когда ферментная система уже сформировалась [Haneda et al., 1971, 1973].

Кислотная активация характерна не для всех известных тирозиназ Asp. oryzae. Опубликована работа, в которой изучалась тирозина мицелия гриба Asp. oryzae RIB 128 (АТСС 22788), используемого в Японии при производстве рисового соуса койи. Фермент окислял L-тирозин (в L-ДОФА), DL- ДОФА, ДОФА-амин•НС1 и тирамин•НС1 и не действовал на пирокатехин, пирогаллол, гидрохинон и хлорогеновую кислоту. Его pH-оптимум лежал при pH 5, а оптимум температурный — при 30-40°. Выдерживание препарата при 70° в течение 15 мин полностью инактивировало его. Активность ингибировалась медьхелатируюшими агентами (диэтилдитиокарбаматом натрия, метабисульфитом калия, цианидом натрия, тиомочевиной и азидом натрия) в концентрациях 10-3 М и выше. Специально была установлена идентичность фермента, синтезируемого грибом Aspergillus oryzae, и фермента, вызывающего побурение койи в процессе «созревания» [Bizen et al., 1972].