Центры m-дифенольной активности


Было далее обнаружено, что Р. anserina синтезирует по крайней мере три различные формы лакказы, отличающиеся по ряду признаков, в частности по термостабильности и молекулярным массам. Лакказа I характеризовалась термолабильностью и высокой молекулярной массой (390000). Лакказа II была термостабильна и низкомолекулярна (70 000-75 000). Лакказа III также была термостабильна, но имела несколько более крупную молекулу (80 000) [Esser, Minuth, 1970; Molitoris, Esser, 1970]. В дальнейшем было установлено, что исследованный экстрат и очищенный препарат из дикого штамма, о которых говорилось выше, содержат преимущественно лакказу I.

Изучение отношения каждой из форм лакказ P. anserina к возможным субстратам фермента показало качественную корреляцию между их молекулярной массой (организацией?) и реакционной способностью [Schanel, Esser, 1971]. Так, низкомолекулярные лакказы II и III могли окислить фенольные соединения, содержащие по крайней мере две окси- или две аминогруппы, независимо от их положения на ароматическом кольце. В то же время лакказа I катализировала только реакции с участием р- и о-дифенолов. Все m-дифенолы, за одним исключением (фторглюцин), были недоступны для нее. Однако после неоднократного попеременного замораживания и оттаивания лакказа I приобретала способность окислять некоторые из испытанных т-дифенолов без изменения активности в отношении р- и о-дифенолов. Авторы предполагают, что наблюдаемое явление может быть объяснено существованием двух активных центров, один из которых имеет сродство к р- и о-дифенолам, а другой — к т—изомерам. Исходя из знания полимерной природы лакказы I, составленной из субъединиц, сравнимых по ряду свойств с лакказами II и III, авторы полагают, что при агрегации последних участки, связывающие m-дифенопы, каким-то образом маскируются из-за пространственной блокады или конформационных изменений молекул мономеров. Обработка же замораживанием и оттаиванием приводит, по-видимому, к каким-то структурным изменениям полимерной молекулы лакказы I, в результате чего центры m-дифенольной активности обнажаются.