Выявление тирозназы у хромогенных актиномицетов


Попытки выявить тирозназу у хромогенных актиномицетов делались неоднократно. Ранее считалось, что меланопигменты синтезируются внутри клетки и выделяются наружу (в завершенном виде или в виде предшественников), поэтому и тирозиназу искали внутриклеточную. Однако очень многие попытки экстрагировать энзим или определить его присутствие в мицелии хромогенных актиномицетов оставались безуспешными. Неудача постигла Лемана и Само (Lehman, Sano, 1908) со штаммом Ad. chromogenes. Плото (Plotho, 1940), применяя энзимный препарат из разрушенного в замороженном состоянии мицелия, получил только светло-серое окрашивание вместо коричнево-черного. Кюстер (Krister, 1963) пытался выделить и очистить препарат из мицелия «активно» хромогенного актиномицета, но он оказался неактивным в отношении тирозина и пирокатехина. В таком же положении оказался Завада (Zavada, 1963) в отношении эндоэнзима двух хромогенных актиномицетов. Однако он нашел у них экзотирозниазу, которая выделялась даже у молодых культур в культуральную жидкость. Последняя при использовании в качестве энзимного препарата окисляла тирозин до меланина, и активность ее подавлялась металлсвязыващими соединениями, известными как ингибиторы тирозиназ других форм жизни. Он считает, что внеклеточный характер этого энзима актиномицетов является причиной того, почему его не могли долгое время обнаружить в мицелии.

Str. scabies, как оказалось, обладает эндо- и экзотирозиназами (Gregory, Huang, 1964b). Количественное соотношение их заметно меняется в зависимости от некоторых факторов (условия культивирования, состав среды). Различия между ними не исследовались, но факт существования двух форм тирозиназ уже сам по себе интересен. Внутриклеточная тирозиназа у этого актиномицета была определена респирометрически также Дугласом и Сан Клементом (Douglas, San Clemente, 1956).