Дезаминирование L-тирозина и L-ДОФА растущими культурами удалось обойти и другим путем. При работе со штаммами Asp. oryzae и Asp. fiavus в качестве источника тирозиназы использовали отмытый мицелий гриба. Конверсия L-тирозина в L-ДОФА в этом случае могла осуществляться почти стехиометрически. Для этого необходимы были, во-первых, значения pH инкубационной системы ниже 5, ибо активность выявлялась только в сильно подкисленной системе (максималь- но при pH 3-4), и, во-вторых, присутствие аскорбиновой кислоты для предотвращения меланиногенеза. Без нее реакционная система постепенно, но неуклонно чернела, пройдя через красный (ДОФА-хромный) этап. Количественный эффект аскорбиновой кислоты на образование L-ДОФА представлен в табл. 7 [Haneda. et al., 1973].

Как показали специальные исследования этого необычного для тирозиназы свойства, подкисляющая обработка активировала фермент, существующий in vivo в латентной форме (Haneda, Takeda, 1974]. Другими оптимальными условиями для реакции превращения L-тирозина в L-ДОФА, осуществляемый наиболее перспективным штаммом Asp. oryzae N-15042, были температура 45-55°, концентрация субстрата 2-3 мг/мл, количество мицелия 50-100 мг влажного веса/мл (что эквивалентно 5-10 мг/сухого вещества/мл), достаточная аэрация (0,5-1,0 об/об/мин^-1) и перемешивание. В этих условиях процесс завершался за 30-60 мин. Большое влияние оказывали также условия культивирования мицелия гриба-продуцента и стадия развития культуры. Активность проявля- лась только в стационарной фазе роста после использования глюкозы, которая, как считают, репрессирует синтез фермента.

Хорошие продуценты L-ДОФА из L-тирозина были найдены и среди штаммов бактерий, принадлежащих к родам Vibrio и Pseudomonas [Larway, Evans, 1962; Yoshida et аl., 1973]. Для штамма Vibrio tyrosinaticus ATCC 19378, как для возможного объекта промышленного использования, были подобраны условия, обеспечивающие наибольший выход продукта. Его получение схематически представлено ниже.

При дробном введении L-тирозина (5-кратное добавление) в среде накапливалось до 3,7 мг/мл L-ДОФА из 4,3 мг L-тирозина/мл, тогда как при однократном — только 2,2 мг/мл. Следовательно, в последнем случае конверсия едва достигала 47%, тогда как в первом — превышала 79%. Заметно стимулировало выход L-ДОФА присутствие в среде L-аскорбиновой кислоты или некоторых других веществ. Концентрация продукта в культуральной жидкости при этом возрастала в 1,4-3,8 раз.