Пигментогенез носит энзиматический характер, что было продемонстрировано специальными экспериментами (Tchan, 1946). Экзоэнзим, названный бензоатазой, окисляет бензойную кислоту до салициловой, которая выступает, по мнению автора, как промежуточный продукт в синтезе «черного вещества». Бензоатаза не аналогична тирозиназе, так как присутствие тирозина в среде не вызывает появления окраски. Кюстер (Kuster, 1953) выявил у Azotobacter полифенолоксидазу скорее лакказного, чем тирозиназного типа, которая, по-видимому, выделялась в среду, поскольку ее активность можно было обнаружить в культуральной жидкости.

Группа французских исследователей изучила динамику и действие физико-химических факторов на этот процесс и получила следующие результаты.

В жидких культурах Az. chrooсoccum «вспышка» пигментогенеза наблюдается на четвертые — пятые сутки, затем интенсивность его не меняется. В первые дни культивирования пигмента почти не образуется (Hardisson, Pochon, 1966).

Влияние температуры изучалось в пределах от 4 до 50° (Wang, Tchan, 1948). Оказалось, что скорость образования черного вещества при температуре ниже 14° и выше 48° равнялась нулю. Наиболее благоприятной была температура от 30° и выше, с оптимумом при 36°.

Сравнение бензоатазной активности и роста показало прямую зависимость уровня энзиматической активности от количества микробного белка, присутствующего в среде. То, что кривая бензоатазной активности отражает уровень образования бензоатазы в зависимости от температуры, было доказано опытами с активностью фильтратов 48-часовых культур, которые показали, что бензоатаза имеет температурный оптимум действия гораздо более широкий, чем оптимум для роста культуры и для синтеза энзима. Она полностью теряет активность при нагревании до 80° в течение 5 мин., т. е. является довольно термостабильной.