На агаровых пластинках, засеянных большим количеством материала, развитие культур происходит очень быстро, и они быстро темнеют. При редком посеве появление пигмента задерживается. На основании этих фактов возникло предположение о существовании связи между интенсивностью образования пигмента и недостатком в среде питательных веществ и, прежде всего, источника углерода (Jones, 1913). Оно было подтверждено Штаппом и Рушманом (Stapp, Ruschmann, 1924, цит. по Rippel, Ludwig, 1925), которые обнаружили, что если культуры на среде с 2% маннита (или глюкозы) — коричневые, то при 4% их окраска много слабее, а при 6% маннита ее в среде нет совсем. Аналогичная картина наблюдалась в опытах Риппеля и Людвига (Rippel, Ludwig, 1925), когда на агаре с 4% маннита колонии оставались белыми в течение четырех недель, в то время как на пластинках с 0,5% маннита культуры были хорошо пигментированы уже на 11—12-й день. При посеве азотобактера (в виде точечного нанесения материала) на черту, разграничивающую две половинки агаровой пластинки, составленной из обычного питательного и голодного агаров, возникали колонии с бесцветной половиной на части пластины, богатой питательными веществами, и коричневой — на голодном агаре (Rippel, Ludwig, 1925).

Эти наблюдения авторы объясняли, исходя из предположения, что образование черного пигмента есть образование меланина из обычного меланогенного субстрата—тирозина.