Кислотное извлечение меланинов


Микробные пигменты различного происхождения, как правило, извлекаются холодными (Hirscb, 1954; Lingappa et al., 1963; Sussman et al., 1963) или кипящими (Schaeffer, 1953; Bartnicki- Garcia, Reyes, 1964; Малама, 1966; Bloomfield, Alexander, 1967) растворами 0,5 н. или 1 н. NaOH или КОН. Время, необходимое для экстракции, варьирует от 2 до 24 час., иногда же полного эффект» извлечения не удается добиться, даже повторяя процедуру неоднократно, В связи с тем, что попытки экстрагировать щелочью (0,5 н. NaOH) меланин из клеток Nadsoniella nigra при комнатной температуре и при кипячении окончились полной неудачей, Рубан с соавторами (1969) прибегли к более жестким условиям извлечения — к автоклавированию суспендированных в щелочи клеток при 0,5 или 1 атм. При этом пигмент легко переходил в растворитель, окрашивая его в густой темно-коричневый цвет.

Растворенный в щелочи пигмент может быть переведен в осадок при нейтрализации НСl или при насыщении раствора (NH4)2 SO4. В некоторых случаях нейтрализация является недостаточной для осаждения пигмента и раствор приходится подкислять до pH 4,6 (Малама, 1966) или даже до pH 2 (Рубан и др., 1969).

Эффективным осадителем может быть также абсолютный спирт, быстрое добавление которого в превосходящем объеме приводит к выпадению пигмента в осадок в виде натриевых солей (Тоllin, Steelink, 1966). Осаждение меланина Nadsonieila nigra становилось хорошо заметным через 2—3 часа. Все сказанное относится к щелочным растворам, из водных растворов пигмент таким приемом не осаждался (Рубан и др., 1969).

Кислотное извлечение меланинов осуществляют горячее 1 н. НСl (Bartnicki-Garcia, Reyes, 1964; Potgieter, Alexander, 1966), иногда в атмосфере азота, чтобы избежать денатурации пигментного комплекса (Bloomfield, Alexander, 1967). Осаждение пигмента вызывается нейтрализацией раствора.