Лакказы некоторых других грибов


Фенолоксидаза черного фитопатогенного аскомицета Leptosphaerulina briosiana, вызывающего пятнистость листьев люцерны, не действовала на монофенолы (L-тирозин и р-крезол), но легко окисляла о-дифенолы (ДОФА) и р-диамины (N,N’-диметил-р- фенилендиамин). Белый мутант гриба, индуцированный УФ-светом, сохранял указанный фермент, который, подобно лакказе исходной формы, полностью ингибировался азидом натрий в концен- трации 7,1•10-2 мМ. Это свойство было использовано в цитохимическом исследовании для решения вопроса о локализаций лакказы в мицелин L. briosiana. Использовав известный метод [Cza- ninski, Catesson, 1974], Саймон и сотрудники [Simon et ai., 1979] получили затем микрофотографии ультратонких срезов клеток мицелия обоих штаммов, обработанных ДОФА. На них четко было видно расположение продуктов ДОФА-оксидазной реакции только в пределах клеточной стенки. Разделяя мнение об участии фенолоксидазных ферментов в инфекционных реакциях у фитопатогенных грибов, авторы считают такую локализацию вполне логичной.

Связь лакказы с клеточными стенками, хотя и не очень прочная, была установлена и для Penicillium cyclopium. При промывании конидий водой большая часть фермента оказывалась извлеченной.

Эта растворимая фракция была очищена в 570 раз осаждением (NH4)2SO4 и хроматографией на сефадексе G-200 и на оксиапатитцеллюлозе. Полученный фермент, как все лакказы, максимально поглощал при λ>600 нм. Его pH-оптимум лежал при pH 6,5, а Кm (для р-фенилендиамина) = 2,3•10-6 М. Максимум активности наблюдался при 40°; половинная инактивация при 50° наступала через 240 мин, при 56° — через 21 мин, при 60° — через 6 мин. Субстратная Специфичность лакказы Pen. cyclopium не отличалась от таковой многих других лакказ: фермент окислял о-дифенолы и p-размещенные субстраты, но с L-тирозином реакция не осуществлялась. Природный субстрат фермента остался невыявленным. Из проверенных потенциальных ингибиторов (8-оксихинолин, NaN3, KCN, р-нитрофенол, о-фенантролин, тиомочевина, семикарбазид, ЭДТА, р-меркурбензоат и диэтилдитиокарбамат Na) в концентрациях до 1 мМ только последнее соединение оказывало глубокое блокирующее действие. Электрофорез в полиакриламидном геле выявил у исследованного гриба три изоформы лакказы [Bartsch et al, 1979].