Окисление экзогенного субстрата


К такому же результату привели аналогичные по методике опыты с еще более «близким» предшественником меланина у V. dahliae- 1,3,8-тркоксинафталином. Однако в этом случае в отличие от варианта со сциталоном пигмент образовывался только на поверхности клеточных стенок и в матриксе микросклероциев. Наблюдалось также некоторое отличие в его окраске (пигмент имел оливково-бурый цвет) и в размерах гранул. Последние расхождения предположительно объясняют возможностью прямого окисления части экзогенного субстрата в окрашенное вещество без его перехода в (-)-вермелон и далее в «природный» меланин [Stipanovic, Bell, 1977]. Если же микросклероции мутантов albino инкубировались с пирокатехином или ДОФА, то образующийся пигмент отличался от пигмента дикого типа отсутствием ясно выраженной грануляции и беспорядочным расположением среди внеклеточных фибрилл и в наружной части клеточной стенки. Более того, его можно было наблюдать только при фиксации материала КМnО4, тогда как меланин, образованный из природного субстрата в микросклероциях дикого штамма или из экзогенного (+)-спиталона в мутантных микросклероциях, был легко различим при фикса- ции как ОsО4, так и КМnО4.

Бурые мутанты brm, имеющие биосинтетический блок между (+)-сциталоном и 1,8-диоксинафталином, давали нормальную цитологическую картину пигментогенеза в присутствии последнего соединения и отклонения с ДОФА и пирокатехином. Синтез пигмента у V.dahliae носит ферментативный характер, поэтому если в опытах использовали прокипяченные микросклероции альбиномутанта, то (+)- сциталон в меланин не превращался. Если же в качестве субстрата применялся ДОФА или 1,8-диоксинафталин, то отмечалось некоторое потемнение этих структур, которое объяснялось отложением на поверхности клеток темных кристаллов и пластин, образующихся аутооксидативным путем в растворе этих веществ. Данный цитохимический прием применялся и для доказательства пентакетидного пути синтеза меланина у грибов Thielaviopsis basicola, Dreschlera sorokiniana, Alternaria sp. и Curvularia sp. Результаты были аналогичными [Bell et al., 1976c; Wheeler et al., 1976b, 1978; Wheeler, Stipanovic, 1979].