Радиоактивный меланин


Тот же самый механизм действует, по всей вероятности, и у меланинсинтезирующего штамма Aspergillus nidulans, у которого была выявлена тирозиназная активность и который при культивировании в среде с меченными по углероду ДОФА и тирозином — DL-3 (3,4-диоксифемил) -2(С14)-аланином и (U-C14) L-тирозингидрохлоридом — накапливал в клеточных стенках радиоактивный меланин. В экстрактах его мицелия был найден тирозин (но не ДОФА), который мог быть, по-видимому, природным субстратом тирозиназы, т. е. предшественником меланина. При исследовании серии мутантов, полученных под действием 8-азагуанина, у которых в той или иной степени был блокирован меланиногенез и , в особенности, мутантов, накапливающих розовый и красный пигменты, были получены доказательства протекания синтеза пигмента по пути тирозин — тирозиназной реакции: пигменты последних мутантов были идентифицированы как интермедиаты меланиногенеза из тирозина — ДОФАхром (индол-5, 6-хинон-2-карбоновая кислота) и меланохром (индол- 5,6-хинон или, что более вероятно, его олигомеры). Энзимологические исследования этого гриба показали, что энзим из штаммов дикого типа характеризуется типичной тирозиназной активностью и типичной тирозиназной кинетикой, т. е. он обладает «крезолазной» и «катехолазной» активностями, действию «крезолазы» предшествует индукционный период, который может быть сокращен при введении в реакционную систему ортодифенолов, монофенолазная активность преобладает. Было отмечено также дифференциальное ингибирование двух активностей медьсвязывающими агентами. Особый интерес представляет тирозиназа бесцветного мутанта, «катехолазиая» активность которой осталась без изменения, тогда как «крезолазная» оказалась утраченной. Энзим термостабилен: период половинного инактивирования очищенного энзима при 60° составляет 3 мин.