Результаты общепринятых идентификационных тестов


Таким образом, результаты общепринятых идентификационных тестов с учетом индивидуальных особенностей соединений позволили отнести рассмотренные пигменты к группе меланинов [Лях, Умаров, 1973]. Аналогичное заключение было сделано нами и в отношении пигмента надсубстрагного мицелия Thermoactinomyces vulgaris РА-11 4а, продуцента протеазы. Окрашенный материал довольно хорошо извлекался из клеточного материала холодной 0,5 н. NaOH, но наилучший эффект получался в условиях нагревания под давлением. Однако даже и в этом случае часть пигмента оставалась прочно связанной с клеточными стенками, поэтому биомасса полностью не обесцвечивалась. Горячая 1 н. H2 SO4 также экстрагировала пигмент, но менее интенсивно, чем щелочь. В присутствии концентрированной H2 SO4 или 96%-ного этанола процесс протекал много слабее. Другие вещества, применяющиеся в качестве предполагаемых экстрагентов, такие, как вода, 1 н. НСl, ацетон, пиридин, толуол, бензол и серный эфир, были неэффективными. Все эти соединения, а также бутанол, метанол и хлороформ не растворяли изолированный и очищенный пигмент. В то же время в концентрированных НСl, H2 SO4 и в меньшей степени в HNO3 меланин Thermoactinomyces vulgaris переходил в раствор, хотя и не полностью. Наилучшим растворителем для изолированного пигмента оставалась щелочь. Полученные растворы обесцвечивались под действием Н2 О2 и зеленели при добавлении раствора КМnО4. Последняя реакция сопровождалась выпадением красно-бурого осадка. Пиков поглощения в УФ-спектре пигмент не имел, полосы поглощения в области 1550-1645 см-1 в его ИК-спекгре свидетельствовали о присутствии амидных связей, другими словами, о меланопротеидном характере препарата. Это подтверждается и высоким содержанием азота в негидролизованном пигменте (11,47%), часть которого несомненно принадлежит азоту белкового фрагмента молекулы. Спектры ЭПР как изолированного пигмента, так и высушенного надсубстратного мицелия представляли собой обычный слегка асимметричный синглет без сверхтонкой структуры с g≈2 и Δ// =7 э. Концентрация стабильных парамагнитных центров составляла 1017/г вещества и сухой биомассы. Точная величина для изолированного пигмента была такой: 0,4х1018/г [Усайте и др., 1979].