Серологический метод


Что же касается лаг-периода, то ранее он рассматривался как метаболически качественно иной этап, чем последующие фазы индукции, поскольку применявшимся энзиматическим методом в бесклеточных экстрактах не удавалось обнаружить никакой тирозиназной активности. Серологический же метод обнаружил в лаг-фазе (продолжающейся по энзиматическому критерию до 8,5 час после добавления к «голодающим» культурам индуктора) небольшое количество реактивного белка: 7 мкг/г мицелия через 4,5 час после введения этионина. Через 60-70 час уровень тирозиназы возрастал в 1500- 2000 раз. В «неиндуцированных» культурах иммунохимический метод, как и ранее энзиматический, присутствия тирозиназы не выявил [Katan et al., 1975].

Следует также упомянуть о работе, в которой был выявлен еще один мощный индуктор тирозиназы у Neurospora — йодацетат. Будучи взятым в концентрации 10-3 М, он увеличивал активность бесклеточных экстрактов гриба на 2630% от контроля [Rossier, Turian, 1976].

Процесс меланогенеза у Neurospora, как известно, «включается» при половой репродукции. Клеточные стенки созревающих аскоспор быстро импрегнируются меланином, отчего аски делаются сначала оливковыми, затем коричневыми и, в конце концов, черными. Пигмент откладывается и в перитециях, которые в полностью сформированном виде имеют очень толстые клеточные стенки и довольно большой размер (до 400-600 мк в диаметре) [Barratt, 1974]. Как было ранее показано, для синтеза черного пигмента организму, по-видимому, необходима пантотеновая кислота — эндогенная у штаммов дикого типа и экзогенная у мутанта со спорами палевого цвета [Threlkeld, 1965]. Давно известны также мутанты с бесцветными (белыми) спорами. Одна из таких форм (WS-мутант) была получена обработкой штамма 74 А-8 дикого типа диметилсульфатом. Му- тантный фенотип не вызывался утратой тирозиназы. Организм сохранил способность синтезировать этот фермент (после индукции циклогексимидом). Потеря пигментации не была абсолютной, и с возрастом культуры споры могли возвращаться к окраске дикого типа [Phillips, Srb, 1967].