Тирозиназа и биосинтез пигмента из тирозина


Тирозиназы актиномицетов изучены слабо и в чистом виде никогда не выделялись. Обычно ограничиваются констатацией факта «есть тирозиназа — нет тирозиназы», основываясь на тесте «тирозиназная реакция», хотя были единичные попытки более подробно охарактеризовать энзим с точки зрения места его действия (локализации), субстратной специфичности и пр.

Находили тирозиназу как внутри клетки, так и вне ее.

В ранней работе Лемана и Сано (Lehman, Sano, 1908) у Act. chromogenes не было найдено растворимой и, следовательно, легко диффундирующей в среду тирозиназы, в результате чего было сделано предположение о ее внутриклеточном характере, что не могло быть проверено из-за невозможности в то время провести гомогенизацию клеток.

Много позднее это сделали Дуглас и Сан Клемент (Douglas, San Clemente, 1956), обнаружившие тирозиназную активность в гомогенатах мицелия Str. scabies респирометрически и визуально по образованию черного пигмента в системах: гомогенат мицелия + тирозин или + ДОФА.

Подобные же данные получили Менчер и Хейм (Mencher, Heim, 1962) в отношении тирозиназы Str. lavendulae. В этом случае активными оказались экстракты разрушенных ультразвуком клеток. Полифенолоксидаза Str. antibioticus также носит эндоцеллюлярный характер и в культуральной среде обнаруживается только в виде следов (Meduri, 1968а). Наибольшей активностью обладала фракция центрифугата разрушенных ультразвуком клеток, которая осаждалась при концентрации (NH4)2SO4), соответствующей 80% от насыщения (Meduri, 1968b, с).

При дифференциальном центрифугировании ультразвуковых гомогенатов клеток мицелия Str. scabies почти вся энзиматическая активность обнаруживалась в супернатанте после центрифугирования в течение 60 мин. при 100 000 g. Однако большая часть суммарной энзиматической активности организма была внеклеточной и обнаруживалась в среде (Gregory, Huang, 1964b).