Феномена кислотной активации


Она затрагивала как гидроксилазную (тирозин —> ДОФА), так и о-дифенолоксидазную (ДОФА —> ДОФА-хннон) активности фермента и «передвигала» pH-оптимум его действия к pH 6,0, т.е. к нормальному для тирозиназ значению. Активация фермента наступала и при обработке препарата соляной или уксусной кислотами. Другие формы активации, помимо сильного подкисления системы, не были выявлены. Неактивированный и активированный ферменты сильно различались по стабильности при хранении. Первый — легко инактивировался, второй — хорошо сохранялся в холодильнике при 4 или 0° в течение продолжительного времени. Свойства активироваться при подкислении фермент не терял и при частичной очистке (~в 30 раз).

Для объяснения феномена кислотной активации авторы вынесли на обсуждение три возможных механизма: освобождение от ингибитора, диссоциация или ассоциация субъединиц и изменение конформации белка. Последнее, по их представлениям, могло осуществляться как изменение конформации активного или связывающего участка, если только это не была модификация характера связи кофакторов с белком. Предполагается, что и in vivo фермент также постоянно существует в неактивной (латентной) форме, которая трансформируется в активную в условиях проведения ферментативного процесса превращения L-тирозина в L-ДОФА при низких значениях pH. Практическое использование этой конверсии рассматривается в главе 5. Фермент Asp. oryzae 15043 локализуется внутриклеточно и в культуральную жидкость прижизненно не выходит [Haneda,Takeda, 1974].