Лакказа Glomerella cingulata


Мицеальная фенолоксидаза (экстракты и адетиновые препараты) фитопатогенного гриба Glomerella cingulata легко окисляла р-фенилендиамин (Km = 1,1•10=3 М), пирокатехин и гваякол, а также хлорогеновую кислоту (Km = 8,5•10-3 М) и d-катехин (Кm = 5,7•10-3 М). Тирозин, р-крезол, резорцин, аскорбат и кумаровая кислота не входили в круг ее субстратов, подтверждая лакказный характер рассматриваемого фермента. Лакказа G.cingulata была однокомпонентна (судя по результатам электрофоретических экспериментов), и оптимум ее активности лежал при pH 6,5 (субстрат-пирокатехин), Полифинилпирролидон, ингибитор о-дифенопоксидаз различного происхождения, не действовал на нее в отличие от цетил-триметиламмонийбромида и некоторых других четвертичных аммонийных веществ, которые подавляли ее активность по механизму неконкурентного ингибирования. Из Cu-комплексирующих агентов фермент ингибировался диэтилдитиокарбаматом, 2, 3-димеркаптопропанолом, азидом натрия и 8-оксихинолином. Окись углерода, как и положено, лакказу G. cingulata не ингибировала.

Было отмечено, что ферментативная активность продуцируется только в культурах гриба, испытывающих недостаток кислорода (стационарное культивирование). При усилении аэрации (на качалке например) определимых количеств фермента обнаружить не удавалось.

В тех случаях, когда фермент синтезировался нормально, его удельная активность достигала максимума на третьи-четвертые сутки. Мицелий при этом оставался кремово-белым. В старых культурах его окраска менялась на серую, но лакказа в мицелии уже отсутствовала. Активность, однако, начинала в это время появляться в среде, и изучение некоторых свойств выделенного оттуда фермента установило его идентичность ферменту мицелия. Интенсивный синтез фермента в период активного роста культуры в условиях кислородного дефицита заставал автора предпо- лагать его участие в измененном дыхании (в качестве герминальной оксидазы?) [Walker, 1968].