Дрожжи Cryptococcus neoformans — высокопатогенный микроорганизм, идентификация которого в клиническом материале представляла значительные трудности, пока не было замечено, что его культуры быстро окрашиваются в бурый цвет, если в среду введен водный экстракт семян Guizotia abyssinica. Другие проверенные дрожжи родов Candida, Torulopsis, Trichosporon, Rhodotorula, Debaryomyces, Lipomyces, Sporobolomyces и Bullera, а также сапрофитные виды рода Cryptococcus подобной реакции не давали, в связи с чем среда с экстрактом семян названного растения стала рассматриваться как дифференциально-диагностическая [Staib, 1962]. Тест полу- чил положительные отзывы в ряде более поздних работ, и было установлено, что активное начало экстрактов имеет о-дифенольную природу и является, вероятнее всего, замещенным протокатеховой или диоксикоричной кислот. Поэтому было предложено заменить указанный экстракт 2,3- или 3,4-диоксибензойной кислотами, что значительно упрощало процесс приготовления среды [Korth, Pulverer, 1971; Pulverer, Korth, 1971] . Дальнейшие исследования показали, что для того чтобы соединение стало субстратом для синтеза пигмента, оно должно иметь гидроксилы в 3- и 4-м положении фенольного кольца. Монофенолы и соединения с иным расположением гидроксилов, такие, как 2,4-, 2,5-, 2,6- и 3,5-оксибензойные кислоты, тирозин, фенилаланин, коричная кислота, 4-оксикоричная и 4-окси-З-метоксикоричная кислоты, оказались непригодными для указанной реакции [Strachan et al., I971]. Изолированная из семян G. abyssinica кофейная кислота (3, 4-диоксикоричиая) и в чистом виде служила прекрасным материалом для быстрого развития пигмента у клинических изолятов Gr. neoformans [Strachan et al., 1971; Hopfer, Groeschel, 1975; Hopfer, Blank,1975; Healy et al., 1977] .

Хорошие результаты получали и при испытании L-ДОФА в качестве субстрата [Paliwal, Randhawa, 1978]: все 80 проверенных штаммов Cryptococcus neoformans продуцировали «диагностический» пигмент при инкубировании их клеток в фосфатном буфере с этим предшественником меланина и цитратом железа. Поскольку для совершенно ясной картины требовалось времени не более одного часа, реакция легла в основу экспресс-метода идентификации Cryptococcus neoformans, метода, даюшего отрицательные результаты с большим числом других дрожжеподобных грибов — Candida, Pichia, Rhodotorula, Torulopsis, Sporobolomyces и др., встречающихся совместно с Cr. neoformans. Высокоспецифичными для «меланогенной» реакции у Cr. neoformans оказались также 4-оксиметаниламид и 3-аминотирозин [Chaskes, Tyndall, 1978а]. Положительные результаты с 10%-ным раствором пирокатехина легли в основу другого экспресс-метода определения этих дрожжей в клиническом материале [Вrеуег et al., 1972]. Подбор подходящих сред для быстрого и надежного определения Crypt. neoformans на основе выявления фенолоксидазной активности продолжается и в настоящее время [Pal et al.,1979; Salkin, 1979].