Уже в ранних работах по изучению хромогенеза у Aeromonas salmonicida было отмечено стимулирующее действие тирозина на образование бурого пигмента в культуральной жидкости или в агаризванной среде [Griffin, 1952]. Аналогичный, но более слабый эффект давал фенилаланин, а также производные обеих указанных аминокислот. Хромогенными субстратами могли служить глицил-L-тирозин, глицил-L-фенилаланин, этиловый эфир L-тирозина и в слабой степени β-2-триэтилаланин. Замещение водородного атома α- аминогруппы в аланиновой боковой цепи тирозина лишало его субстратной активности. То же самое получалось при замещении атома водорода в третьем положении бензольного кольца. Соединения, содержащие ацетил или хлорацетил вместо водорода α -аминогруппы или гидроксильную группу вместо водорода β-угле- родного атома в боковой аланиновой цепи фенилаланина, также не использовались организмом для синтеза пигмента [Griffin et al., 1953а]. Эта субстратная специфичность, довольно ограниченная, соответствовала свойствам ортофенолоксидазной системы. Однако положительная реакция с параафенилендиамином (образование пурпурночерного вещества) свидетельствует скорее о наличии лакказной (парадифенолоксидазной) активности, чем тирозиназной (ортодифенолоксидазной), как полагают авторы [Griffin et al., 1953b]. He исключено, что организм образует оба этих фермента.

Прямым экспериментальным подтверждением непосредственного участия тирозина в хромогенезе Aeromonas salmonicida явилось обнаружение преимущественного включения радиометки в пигмент.