Можно отметить, что знание природы черно-коричневых внутриклеточных пигментов актиномицетов значительно продвинулось вперед по сравнению с тем материалом, которым мы располагали при написании книги «Микробные меланины» [Лях, Рубан, 1972].
В частности, в наших экспериментах [Лях, Умаров, 1973] использовались пигменты двух термофильных актиномицетов, часто встречающихся в илах горячих источников Узбекистана [Умаров, 1975]. Первый из них —Actinobifida chromogena Т-4, второй — Micropolyspora sp. 104. Темный пигмент обоих штаммов оказался столь прочно связанным с клетками, что извлекался из них 0.5 н. раствором NaOH только при автоклавировании (1 атм). Но и в этих жестких условиях экстракция оказывалась неполной, и мицелий оставался окрашенным. Применение органических растворителей (хлороформа, эфира, этилового спирта, ацетона и уксусной кислоты) оказалось совершенно неэффективным. Однако в мицелии изученных актиномицетов присутствовали какие-то соединения, окрашивающие спирт в малиновый (Micropolyspora sp. 104) или ярко-оранжевый (Actinobifida chromogena Т-5) цвет, уксусную кислоту в красно-коричневый и хлороформ в светло-желтый цвет. Далее эти пигменты не изучались.
Черно-коричневые пигменты, экстрагированные 0,5 н. раствором NaOH из мицелия обоих штаммов, осаждались концентрированной соляной кислотой. Выделение из раствора твердых частиц пигмента наблюдалось уже при нейтральном значении pH системы; дальнейшее подкисление до pH 3 значительно увеличивало интенсивность выпадения осадка. Осажденный пигмент, черный у Micropolyspora sp. 104 и темно-коричневый у Actinobifida Т-5, быстро и полностью отделялся центрифугированием при 10-15 тыс. об/мин. Супернатанты в обоих случаях были слегка окрашены в желтый цвет. Полученные пигменты далее очищали от примесей последовательным многократным промыванием (в условиях центрифугирования) дистиллированной водой, спиртом и ацетоном. После переосаждения очистку пигментов повторяли. Перехода в спирт и ацетон окрашенных фракций при этом уже не наблюдалось. Полученные препараты высушивали и использовали для изучения характеристик пигментов по принятым для меланинов тестам.