Тирозиназная активность у гриба Ascophyta pinodella


Тирозиназная активность была обнаружена у гриба Ascophyta pinodella, вызывающего побурение гороха (Madhosingh, 1968), и у другого патогенного для растений гриба Fusarium vansinfectum (Ramakrishna Rao, Schanmugasundarum, 1967).

Бесклеточные препараты Blastocladiella emersonii окисляли пирокатехин, тирозин и ДОФА (Cantino, Horenstein, 1955). Для функционирования системы энзим — субстрат был необходим акетоглутарат как кофактор, который, по всей вероятности, участвовал в сопряженной реакции: он восстанавливался в изолимонную кислоту TPN-дегидрогеназой этой кислоты, при этом происходило окисление ортохинона (субстрат — пирокатехин) в оксиоргохинон ТРN-«хиноноксидазой». Авторы (Cantino, Horenstein, 1955) предполагают, что именно эта система является посредником при синтезе меланина у этого гриба.

Тирозиназа Neurospora crassa и Glomerella cingulata, как показали Горович, Шен и др. (Horowitz, Sben, 1952; Sussman, Markert, 1953), является свободным, не связанным с субклеточными частицами, энзимом. В экстрактах мицелия она находится в «растворенном» состоянии и может быть получена из них в кристаллическом виде (Fling et al., 1963).

Тирозиназа Fusarium vasinfectum обнаруживается в супернатанте после центрифугирования при 2000 об/мин разрушенных в фосфатном буфере клеток, откуда энзиматический белок может быть осажден спиртом, вновь растворен в буфере и высолен сульфатом аммония. Максимум тирозиназной активности содержат фракции, полученные при осаждении сульфатом аммония в концентрации 40—60% от насыщения (Ramakrishna Rao, Schanmugasundarum, 1967). Она окисляет тирозин, оптимальная концентрация которого составляет 2,8х10-4 мкМ. Константа Михаэлиса—1,33х10-4 мкМ. Энзим термолабилен: оптимум для его действия 28°. Энзим активируется медью и в меньшей степени другими ионами — Fe++, Мn++, Са++ и Mg++. В его активный центр, по-видимому, входят тиоловые группы. Активность не связана с клеточными структурами (растворимая фракция). Рамакришна с соавторами (Ramakrishna Као, Schanmugasundarum, 1967), ссылаясь на данные Горовица и Шена (Horowitz, Shen, 1952), считают, что она похожа по свойствам на тирозиназу Neurospora crassa.