Для быстрого осаждения пигментов из растворов в NaOH требовалось очень сильное подкис- ление (до pH 2). В этом случае пигменты сразу же превращались в рыхлые, довольно крупные хлопья, в течение нескольких минут оседающие на дно сосуда. Этот осадок легко отделяется при 3 тыс. об/мин (15 мин.) от окрашенной в желтый цвет жидкости.
Из щелочных растворов все изученные меланины (и микробные, и синтетические) могут быть осаждены не только кислотами, но и абсолютным спиртом. Быстрое добавление этого реактива в превосходящем объеме приводит к выпадению пигмента в осадок в виде натриевых солей (как считают Tollin, Steel ink, 1966). Из водных растворов пигменты таким приемом не осаждались.
Экзопигмент штамма 1-365 присутствовал в культуральной жидкости в двух формах: в растворенной и в виде гранул (хорошо различимых при микроскопировании с иммерсией), имеющих различные коэффициенты седиментации.
Однако, в отличие от внутриклеточного, этот пигмент выпадал в осадок при подкислении только через 7—10 суток и не в виде крупных хлопьев, а в виде очень тонкого порошковидного материала.
Оказалось также, что этот экзопигмент может быть выделен из культуральной жидкости и другим путем — методом Блекберга и Венджера (Blackberg, Wanger, 1933) в модификации Менчера и Хейма (Mencher, Heim, 1962) с применением персульфата калия и метанола. Он осаждался только после продолжительного выдерживания на холоду (7—8 дней).
Все три пигмента (365 к — клеточный штамма 365, 1-365 к — тоже клеточный мутанта и 1-365 вк — его внеклеточный), выделенные в виде осадка из щелочного экстракта или культуральной жидкости, обрабатывались далее (очищались и фракционировались) путем последовательного промывания дистиллированной водой, этиловым спиртом и ацетоном.
Наличие фракций клеточных пигментов, растворимых в спирте п ацетоне, возможно, связано с частичным разрушением (деполимеризацией?) пигмента при щелочном гидролизе. С другой стороны, нельзя исключить, что обе эти фракции присутствуют и в нативном пигменте, в особенности у мутанта с нарушенным пигментогенезом, что подтверждается экспериментами с пигментом штамма 1-365 вк.